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為什么qPCR提RNA不提DNA

定量PCR（qPCR）是一種在PCR反應(yīng)中實時監(jiān)測核酸擴(kuò)增產(chǎn)物的方法。為什么qPCR提RNA不提DNA？RNA更能反映gene的表達(dá)水平依據(jù)中心法則，細(xì)胞內(nèi)的DNA序列首先被轉(zhuǎn)錄成RNA分子，特別是信使RNA（mRNA），隨后mRNA攜帶遺傳信息，用于指導(dǎo)蛋白質(zhì)的合成。mRNA的豐度和多樣性是衡量基因表達(dá)水平的關(guān)鍵指標(biāo)，它們直接關(guān)聯(lián)到特定基因在特定時間和條件下的活性。與蛋白質(zhì)相比，RNA的水平變化能夠更快地反映基因表達(dá)的動態(tài)變化，因為RNA的穩(wěn)定性相對較低，其水平變化可以迅速...

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RNA和WB蛋白的關(guān)系是怎樣的？

qRT-PCR（定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)）和Westernblot（蛋白質(zhì)印跡法）是兩種常用的生物分子檢測技術(shù)，它們分別用于檢測mRNA和蛋白質(zhì)的表達(dá)水平。雖然蛋白質(zhì)是由mRNA翻譯而來，但mRNA的表達(dá)水平總是與蛋白質(zhì)的表達(dá)水平一致嗎？做實驗任何一個結(jié)果如果你驗證了幾遍都是一樣，那么請不要懷疑自己，也許不是你做錯了，試圖去解釋這種現(xiàn)象!蛋白表達(dá)和RNA水平不一致的原因有：轉(zhuǎn)錄后調(diào)控：mRNA在轉(zhuǎn)錄后可以經(jīng)歷多種調(diào)控過程，如剪接、編輯、降解和穩(wěn)定性調(diào)控。這些過程可以影響mRNA...

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加藥處理的細(xì)胞如何換液？

加藥處理的細(xì)胞換液，需要遵循一定的操作步驟，確保實驗環(huán)境的無菌以及細(xì)胞的健康生長。以下是換液的一般步驟：1換液時間：一般建議每24或者48小時換液一次。2準(zhǔn)備新的培養(yǎng)基：根據(jù)細(xì)胞類型和生長需求，選擇合適的培養(yǎng)基。確保培養(yǎng)基新鮮、無菌，并在使用前預(yù)熱至37℃。收集舊培養(yǎng)基：輕輕搖晃培養(yǎng)瓶，使舊培養(yǎng)基充分混合。使用移液器將舊培養(yǎng)基收集到廢液缸。注意不要觸碰到細(xì)胞表面。3添加新培養(yǎng)基：將收集到的舊培養(yǎng)基丟棄，向培養(yǎng)瓶中加入新的培養(yǎng)基。確保新的培養(yǎng)基充分覆蓋細(xì)胞表面，避免氣泡產(chǎn)生，也...

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你知道細(xì)胞轉(zhuǎn)染實驗中轉(zhuǎn)染效率低的原因嗎？

轉(zhuǎn)染細(xì)胞效率低下的原因在生物醫(yī)學(xué)研究中，將外源基因?qū)爰?xì)胞以研究其功能或使細(xì)胞展現(xiàn)出新的特性是非常常見的實驗手段。然而，轉(zhuǎn)染細(xì)胞的效率低下一直是科研人員面臨的一大難題。今天小編將探討轉(zhuǎn)染細(xì)胞效率低下的原因，以期為提高轉(zhuǎn)染效率提供有益的思路。1.細(xì)胞類型和狀態(tài)不同的細(xì)胞類型具有不同的轉(zhuǎn)染效率。一些難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞，如神經(jīng)元和肝細(xì)胞，通常需要更復(fù)雜的轉(zhuǎn)染技術(shù)。此外，細(xì)胞的生長狀態(tài)也會影響轉(zhuǎn)染效率，處于對數(shù)生長期的細(xì)胞更容易接受外源基因。如果是貼壁細(xì)胞的話，貼壁率應(yīng)該在70-80%；如...

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RNA的種類與功能介紹

RNA的分類1.信使RNA(mRNA)信使RNA是RNA的一種，主要功能是將DNA上的遺傳信息傳遞到蛋白質(zhì)合成機(jī)器——核糖體上，從而實現(xiàn)蛋白質(zhì)的。信使RNA的結(jié)構(gòu)簡單，一般由一條單鏈RNA組成。mRNA的長度差異較大，哺乳動物的mRNA長度一般在5×102～1×105個核苷酸，這種長度的差異使得mRNA能夠攜帶更多的遺傳信息。在細(xì)胞中，mRNA的含量占到了總RNA的1%～5%，雖然mRNA的含量相對較少，但種類繁多，因為人體中約有2萬多個基因，每個基因都會產(chǎn)生一種mRNA。正...

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