А√天堂资源中文,免费看大片的播放器,51国产黑色丝袜高跟鞋,国产精品无码无卡毛片不卡视

免費咨詢熱線:
技術文章
首頁 > 技術中心 > NGS測序之文庫構建

NGS測序之文庫構建

 更新時間:2024-04-08 點擊量:2314

由于二代測序讀長的限制,不可能一下將一個很長的基因序列測通,因此需要先將長基因序列隨機片段化成小片段,這樣的話,這些片段就可以覆蓋整個基因組。所以需要構建文庫。

一、文庫構建的步驟

文庫構建大致步驟類似,但是各有各自du特的點,例如,RNAseqmiRNAlncRNA,mRNA方法各有差異,具體方法以后有機會再補充。這里以IlluminaPE文庫為例,其流程圖如下圖。

6-2.png


二、文庫構建詳細步驟

1DNA片段化 (Fragment DNA

使用超聲、酶或者加熱的方式將DNA樣品打碎成小片段,一般在300 ~ 800bp之間除非有特殊要求。

2末端修復(End Repair

補平片段化時導致的不平末端。

33' 末端加“A" A-tailing

3‘ 末端加A,轉(zhuǎn)換為粘性末端,與adapter 互補配對,因為adapter 3‘端有一個突出的T

4)接頭連接( ligation adaptor

這一步有兩種不同的添加策略如下圖。

6-3.png

左邊的圖是直接在fragment DNA的兩端直接加上full Y-adapter, adapter中已經(jīng)包括了和P5/P7 oligo互補的序列, index, 以及Read1/Read2的測序引物。

右邊的圖是先在fragment DNA的兩端加上PE adapter, 然后再引入和P5/P7 oligo互補配對的序列以及index序列,分兩步:

A. PE adapter添加利用堿基互補配對的原則,加上PE adapter。PE adpater中一部分是建庫PCR富集時候需要用的引物序列,另一部分是測序時需要用的引物。

B.PCR 添加 index,P5,P7

Index也稱barcode,用來區(qū)分不同樣本的文庫,因為測序儀一個lane產(chǎn)生數(shù)據(jù)量若干Gb,為了最da化利用測序儀,一次上機常會進行多個樣本文庫混合測序,在后續(xù)分析時,Index用來區(qū)分數(shù)據(jù)是來自哪個樣本。

      PCR富集目的片段

進行PCR擴增,循環(huán)數(shù)與投入的DNA量有關,使得文庫達到上機濃度。

擴增文庫大小質(zhì)檢

使用Agilent 2100對文庫的insert size進行檢測。

文庫濃度定量

Qubit3.0 進行初步定量 Q-PCR對文庫的有效濃度進行準確定量,至此文庫構建結(jié)束。

更多有關NGS測序之文庫構建的相關內(nèi)容,請聯(lián)系BioDynami建庫試劑盒代理商——北京百奧創(chuàng)新科技有限公司

image.png














少妇极品熟妇人妻无码| 国产精品美女www爽爽爽视频| 抖音81个走八光视频合集| 婷婷五月六月激情综合色中文字幕| 国产处破苞无码精品| 亚洲精品国产精品乱码视色| 欧美vivoy13高清| 夜来香视频免费观看| 97精品国产一区二区三区| 日本无码黄动漫在线观看| √天堂中文WWW官网在线| 麻豆高清免费国产一区| 国产人妻777人伦精品hd| 午夜福利理论片在线观看播放日韩视频在线观看 | 无码AⅤ精品一区二区三区| 国产啪亚洲国产精品无码| 亚洲欧美中文日韩v在线| 7777精品伊人久久久大香线蕉| 亚洲色欲色欲www在线丝| 中文字幕av一区二区三区 | 97久久精品人人槡人妻人 | 亚洲成AV人片在线观看无线 | 漂亮人妻去按摩被按中出| 人人添人人妻人人爽夜欢视AV| かしこまりました中文在线| 亚洲av午夜精品麻豆av| 亚洲日韩乱码中文无码蜜桃臀| 99热精品久久只有精品| 亚洲精品TV久久久久久久久| 亚洲国产精品久久久久秋霞小 | 2019日韩中文字幕mv| 久久综合九色欧美综合狠狠| 精品人妻无码区在线视频| 末成年女AV片一区二区丫| 亚洲国产精品无码久久青草| 美女高潮无遮挡免费视频| 欧美性xxxxx极品老少| 狠狠噜天天噜日日噜视频麻豆| 精品香蕉久久久午夜福利| 国产日韩综合一区二区性色av| 国产VA免费精品高清在线观看|